Som en nybörjare i ett forskningslabb, var det allra första projektet jag fick att pipettera inkrementella mikro-volymer H2O på en bit parafilm.
Tråkigt!
Vägning av vätskan på parafilm och jämföra vikt mellan 10 replikat för varje mikro-volym fortsatte en vecka innan jag rörde något annat i dett labb!
Lyckligtvis hjälpte brist på finansiering mig att sluta på detta labbet och till fler intressanta projekt under åren.
Däremot har vikten av att ha en bra teknik för pipettering som jag tränade.
Pipetten är att ett instrument i labbet som kan ge olika resultat baserade på den person som använder den.
Detta är speciellt sant när man kör kvantifiering experiment.
Kolven släpps för snabbt, inte förvätning av en ny spets och inte doppa spetsen tillräckligt långt är mycket vanligt när man arbetar för snabbt i labbet.
Sådana misstag kan leda till skillnader i volym mellan prover, vilket resulterar i skeva analysresultat.
Här är 10 tips som kan komma till hands när man utbildar nya studenter i labbet.
Använd rätt pipettspets
– Det är lätt att säga!
Använd rätt topp med rätt pipett.
Alternativa varumärken är godtagbara om de har testats av säljf företaget för att arbeta med ditt pipett varumärke.
Förväta pipettspetsen
– Förevätning ökar fuktigheten inuti spetsen, vilket minskar förångning.
Undersök spetsen innan dispensering av provet
– När du sänker spetsen för långt ned i vätskan, finns det ofta extra droppar som fastnar på utsidan av spetsen (till exempel vid pipettering av enzymer).
Se till att du torka av utsidan försiktigt före dispensering.
Se till att inte vidröra spetsöppningen för att undvika att suga bort en del av önskad volym!
Använd standardläge pipettering
– Kom ihåg att använda det andra stoppet på pipetten för att dosera hela volymen.
Paus konsekvent efter aspiration
– Efter att ha tappat upp vätska, gör det till en vana att stanna innan du drar ut spetsen helt.
Vätskan fortfar att strömma in i spetsen även efter att kolven stannat.
Dra pipetten rakt ut
– Sidorna på behållaren som vätskan sugs orsakar uppsugning och förlust av volym
Använd konsekvent kolv tryck och hastighet – “Det handlar om rytm – repeterbara åtgärder ger repeterbara resultat”!
Sänk spetsen till rätt djup
– Stor volym pipetter (1-5 ml) bör vara nedsänkt 5-6 mm under menisken.
Mindre volymer pipetter bör nedsänkas 2-3 mm under menisken.
För mycket nedsänkning kommer att orsaka vätska att hålla sig till utsidan av spetsen, och alltför liten nedsänkning kommer att resultera i luftbubblor.
Minimera hanteringen av pipetten och toppen
– Värmen överförs från händerna till pipetten och / eller toppen, detta kan påverka leveransvolymer.
Jobba på temperaturjämvikt
– Jobba på en konstant temperatur minimerar variationer i pipetterade volymer.
Detta är lite knepigt eftersom många reagenser kräver lagring på is, medan processen för pipettering sker vid rumstemperatur!
Om förfarandet inte tillåter temperaturjämvikt, då finns det mer viktiga tips som du bör lära dig.