Öva god pipetteringsteknik

Se till att du vet hur man pipettera ordentligt.

De viktigaste reglerna att följa är:

Pipettera med en långsam, mjuk rörelse
Håll pipetten vertikalt när du drar upp vätska
Endast doppa spetsen något vid tömning av vätska – annars kommer du belägga utsidan av spetsen med vätska, som kommer att överföras tillsammans med volymen inuti pipetten.
När dosering av vätskan, håll pipetten vertikalt men hålla sidoväggen det mottagande kärlet i 45 grader.
Pipettera mot sidoväggen eller i vätskan som redan finns där.

Testa hur bra du är.

Kontrollera riktigheten av din pipettering genom dispensering 100 mikroliter på en fin våg.
Massan av droppen du gör bör vara cirka 0,1 g.
Gör nu samma sak 10 gånger och notera massorna du får. Om variationen är större än + / – 0,5% måste du antingen byta pipett eller så du behöver du öva mer!

Vet knepen som ökar din noggrannhet

Förvätning. När du tömmer vätska från pipetten så finns en beläggning av är kvar på toppen, vilket gör tömda volymen något mindre än den borde vara.
Förvätning av spetsen innan du pipetterar avhjälper detta.
Bara dra upp vätskan i din pipett och töm den sedan tillbaka till den ursprungliga kärlet. Beläggningen är nu på toppen så när du nu dra upp vätskan igen och fördela det i det mottagande kärlet, kommer ingen av den gå förlorad mot vätning.
Detta rekommenderas endast för större volymer än 10 mikroliter.

Omvänd pipettering är en bra teknik för pipettering av viskösa vätskor eller flyktiga lösningsmedel. Tryck kolven ner till utrensningsläge (den andra hållplatsen) och dra upp vätskan.
Det finns alltför mycket vätska i spetsen vid denna punkt, men när vätskan töms genom att trycka kolven till den aspirationsposition (första stoppet), är den extra vätskan kvar i spetsen.
Med denna metod är spetsen “automatiskt” i förväg vätt men den extra vätskan hjälper också vid pipettering flyktiga lösningsmedel eftersom en del av lösningsmedlet kommer att tendera att avdunsta till luftkudden.

Ta omgivningstemperaturen i beaktande.
Din pipett har kalibrerats vid rumstemperatur.
Om du arbetar vid en annan temperatur (t.ex. i ett kallt rum) kommer din pipett inte att fördela de visade volymerna.

14. Ta provtemperaturen i beaktande.
I en nyligen Nature Methods publicering, observerade Millet och Barthlen ett märkligt fenomen att när de behövde pipettera kalla prover, den första dispenserade volymen var alltid är större än väntat, men efterföljande pipettering med samma spets gav rätt volym.
Detsamma gällde för varma prover, förutom att den första dispenserade volymen var mindre än väntat.
Deras lösning var enkel – dosera den första volymen tillbaka till den ursprungliga kärlet, sedan börja pipettering.

Använd en vettig pipett för den volym du vill ha. Riktigheten i din pipett minskar när dispenserade volymen närmar sig minsta pipetten kan hantera.
Så för dispensering 15 mikroliter, till exempel, skulle en 1 ml pipett vara fruktansvärt, en 200 mikroliterpipett inte så bra och 20 mikroliterpipett ideal.

Använd den största möjliga volym. Stora volymer är lättare att pipettera noggrant än små.
Säg att du utför en analys där man måste noggrant pipettera 5 mikroliter.
Pipettering 5 mikroliter exakt är inte lätt och kommer sannolikt i hög grad bidra till statistiska fel i dina resultat.
Å andra sidan, om du utspäder förrådslösningen 10 gånger och pipetterade 50 mikroliter, skulle detta vara mycket mer exakt, vilket ger dig mycket snävare felstaplar.

Och slutligen, så här gör du för att få maximal noggrannhet.
En analysvåg är mer exakt än någon pipett.
För maximal noggrannhet, använd din pipett för att dosera den volym du behöver, men gör det i en tarerad behållare på en våg.
Sedan beräknar du det verkliga pipetterade volymen från massa (volym = massa / densitet). Naturligtvis fungerar detta endast för lösningar av känd densitet – men för vattenlösningar, som har en densitet av 1, är detta inte ett problem.